MATERIALES Y MÉTODOS

90 pollos de engorde machos del mismo origen fueron vacunados con el virus de la enfermedad de Newcastle (Poulvac® NDW) al día de edad y divididos en 3 tratamientos de 30 aves cada uno. Las diferencias entre los tratamientos fueron el tipo de alimento administrado a los diferentes grupos. Los tratamientos consisten en el control negativo (T1), solo alimento regular para pollos de engorde, control positivo (T2), y donde en el alimento regular se incluyó 2.8 ppm de aflatoxina y el grupo Milbond (T3), que incluyó la aflatoxina (2.8 ppm) y Milbond al 0.25%. Los animales se mantuvieron en jaulas con 10 aves cada una (3 réplicas por tratamiento). Se recolectaron muestras de sangre a los 3, 7 y 21 días posteriores a la vacunación. Las muestras se transportaron y procesaron inmediatamente en el Laboratorio de Análisis Biológico de Imunova para citometría de flujo. La técnica se utiliza para cuantificar la presencia de linfocitos T auxiliares (CD4+), linfocitos T auxiliares de la mucosa y linfocitos T de memoria o vírgenes en muestras individuales. Este procedimiento es actualmente un método establecido para estudiar el sistema inmunológico animal. La citometría de flujo se realizó con un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson). Se detectó fluorescencia verde (de FITC) en el canal FL1 (530/30 nm) y fluorescencia naranja en el canal FL2 (585/42 nm). Se analizaron células con hasta 10 000 eventos en la ventana de linfocitos (basándose en la dispersión frontal y lateral, incluyendo trombocitos contaminantes). Los datos se analizaron con el software FlowJo (TreeStar, Inc.). Los análisis estadísticos se realizaron para cada tipo de célula y día mediante un modelo lineal mixto generalizado (distribución de Poisson y enlace logarítmico), con tratamiento fijo y muestra aleatoria.

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

La tecnología de citometría de flujo permite caracterizar el estado inmunológico, lo que permite evaluar el mecanismo de acción de ciertas vacunas. De este modo, se pueden detectar con gran precisión pequeñas interferencias en el sistema inmunológico, prediciendo cómo este ha podido generar una respuesta frente a la vacunación. La respuesta inmune evaluada mediante citometría de flujo, mediante el mapeo de tres subpoblaciones celulares diferentes (linfocitos T auxiliares (CD4+), linfocitos T auxiliares de las mucosas y linfocitos T de memoria o vírgenes), mostró que el grupo alimentado con Milbond TX® y el grupo control negativo presentó una respuesta inmunitaria celular significativamente mayor que el grupo tratado con aflatoxina. Todas las subpoblaciones celulares evaluadas se redujeron en el grupo tratado con aflatoxina en comparación con los controles, mientras que Milbond TX® contribuyó a reducir numéricamente dichos efectos nocivos (resultados no mostrados). La adición de Milbond TX® al alimento aumentó el número de linfocitos, en niveles similares a los observados en el
grupo control sin desafío, mientras que los grupos que solo recibieron el desafío presentaron una disminución en el recuento de linfocitos (Figura siguiente). La presencia de micotoxinas altera el desarrollo normal del sistema inmunológico de las aves analizadas en este experimento. El uso del aditivo antimicotoxinas Milbond TX® logró revertir los efectos de las micotoxinas en la respuesta a la vacuna. Concluimos que Milbond TX® ayudó a proteger la respuesta inmune cuando las aves se alimentaron con pienso positivo para aflatoxinas, lo que podría contribuir a una mejor respuesta inmune adaptativa tras la vacunación contra la enfermedad de Newcastle.